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ELISA試劑盒的檢測型特異性抗體
更新時間:2016-07-05   點擊次數(shù):1571次

    其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體( 聚苯乙烯微量反應板 )表面,使酶標記的抗原-抗體反應在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。

1、競爭ELISA試劑盒:此法主要用于測定小分子抗原及半抗原,其原理類似于放射免疫測定。
其基本程序為:
① 抗體包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干
② 加入待檢抗原及一定量的酶標抗原(對照孔僅加酶標抗原)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干
③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液
④ 用ELISA試劑盒檢測儀測定OD值。
   被結(jié)合的酶標抗原的量由酶催化底物反應產(chǎn)生有色產(chǎn)物的量來確定,如果待檢溶液中抗原越多,被結(jié)合的標記抗原的量就越少,有色產(chǎn)物就減少,這樣根據(jù)有色產(chǎn)物的變化就可求出未知抗原的量。此法的優(yōu)點在于快速、特異性高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測;其主要不足在于每種抗原都要進行酶標記,而且因為抗原的結(jié)構(gòu)不同,還需應用不同的結(jié)合方法。此外試驗中應用酶標抗原的量較多。
2、阻斷ELISA 
   本法主要用于。該方法現(xiàn)已成為豬傳染性胃腸炎(TGE)、豬偽狂犬?。≒R)及豬胸膜肺炎(AP)的主要檢測方法。
下面以AP2型抗體的阻斷ELISA試劑盒檢測法為例介紹其操作程序:
① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干
② 用200μl阻斷緩沖液進行封閉 → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干
③ 加工作量1:4稀釋被檢豬血清100μl → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干
④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干
⑤ 加100μl工作量豬抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干
⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液
⑦ 用ELISA檢測儀測定OD值。

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