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一種廣泛適用的RNA提取方法
更新時(shí)間:2010-09-28   點(diǎn)擊次數(shù):3393次

分離提取高質(zhì)量的RNA是基因表達(dá)、調(diào)控與基因工程等研究的基礎(chǔ),而RNase、多糖及多酚類物質(zhì)嚴(yán)重干擾RNA的分離提取過程.現(xiàn)利用硅藻土對(duì)RNase的吸附性,結(jié)合PVP、高鹽及乙二醇丁醚沉淀等處理,建立了一種廣泛適用的RNA提取方法.在富含多糖的玉米胚乳,富含RNase的動(dòng)物肝臟,多酚多油脂的銀杏、麻瘋樹以及木霉、酵母等10多種RNA提取困難的動(dòng)、植物與微生物材料中都提取出完整性好,得率高的RNA.RT-PCR實(shí)驗(yàn)表明,提取的RNA能夠用于后續(xù)的分子生物學(xué)研究.硅藻土-苯酚法提取RNA的得率是異硫氰酸胍法的3倍多.此外, 將分離提取的總RNA經(jīng)過LiCl與PEG8000加NaCl沉淀步驟有效地去除了大片段RNA,以水稻Osa-mir-156的成熟序列設(shè)計(jì)特異引物做莖環(huán) RT-PCR,結(jié)果證明,富集得到的小RNA可以用于miRNA克隆等后續(xù)實(shí)驗(yàn).

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